由于在纽约自然历史博物馆担负警卫有出色表现，拉瑞（本·斯蒂勒 Ben Stiller 饰）出任某家电小公司的CEO，并且还在电视上接收了有名脱口秀主持人的访谈，儿子对他敬慕，爱情如影随形，一派春风自得的样子。不过，好景不长，当他故地重游，却意外发现馆长已经因为更新展览并预备把过时的展品挪到华盛顿的史密森博物馆继续展出。这让拉瑞认为有些朝气，他认为自己有义务重振博物馆之雄风，于是他决定留下来再做一晚警卫，以唤起那些老朋友的共同努力。事实上，在搞定了罗斯福（罗宾·威廉斯 Robin Williams 饰）、林肯、拿破仑、伊凡雷帝和阿尔•卡邦等人之后，他遭遇了一个劲敌——险恶的古埃及法老的卡门拉，二人在夜晚再度上演了博物馆的惊魂对决……
